质粒(pUC19)是常见的重组DNA 克隆载体，常用于基因克隆、表达、定位、检测等。构建质粒时主要包罗限制性内切酶切割、毗邻和转化等历程。
质粒构建主要分为以下几个步骤：
1、限制酶切
用适当的限制酶切割目的DNA 和载体质粒，切割后接纳目的基因片断和质粒。
2、毗邻反映
用T4 DNA毗邻酶把目的基因片断与质粒举行毗邻。对于未切割或切割不完全的目的基因片断，毗邻反映后需要举行一次酶切验收。
3、转化
把毗邻产物转入大肠杆菌(E.coli)等宿主中。转化后的菌落筛选、扩增、提取纯化多次操作既可获得所需的质粒。
需要注意的是：
1. 各步骤条件要求适合，尤其是温度、酶浓度和反映时间等参数差异会影响实验结果。
2. 测序较重要，可使用Sanger测序对构建历程举行审查，确认所得质粒无误后举行大量扩增。
